quimica forense
diego rinaldi
FaCENA / UNNE
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14.09.2012 | Laboratorio Nš2
A cargo de: Lucre Bogado - Polo Espindola

 

                                                    Laboratorio Nº2

 

 

 

Tema: Técnicas de Screening. Cromatografía en Placa Delgada.

 

Objetivos:

-         Conocer las diferentes técnicas de Screening y su aplicabilidad.

-         Realizar las Cromatografías básicas de la rutina toxicológica.

-         Aprender a correlacionar los hallazgos médico-legales para le elaboración de razonamientos lógicos que permitan orientar en la búsqueda.

-         Interpretar los resultados de las técnicas aplicadas.

 

 

MÉTODOS DE SCREENING:  

Su aplicación es de carácter exploratorio, cuyo fin es buscar una o varias drogas en una muestra. La ventaja es el requerimiento de una mínima extracción y procedimiento de limpieza, además de ser bastante económicos y de fácil aplicación. Su desventaja es presentar un amplio rango de sensibilidad y especificidad.. Se ha demostrado que los falsos negativos son poco probables en este tipo de muestras, mostrando una buena correlación con muestras positivo-positivo en niveles residuales por encima limite de detección, sin embargo el estudio de drogas por debajo o cercano a este nivel da falsos positivos.

 

TIRAS AG-AC PARA ORINA:

Los inmunoensayos  son simples y para una sola muestra. Los precios varían de acuerdo al tipo de inmunoensayo. Se debe seguir las indicaciones del fabricante en cuanto a los cuidados que hay que tener para realizar todos los procedimientos.

En este práctico se van a aplicar estos métodos en orina para detectar diferentes tipos de drogas.

 

 

 

 

 

 

 

 

CROMATOGRAFÍA EN PLACA DELGADA:

La cromatografía en capa fina (CCF) es la técnica de separación e identificación de sustancias químicas, por la diferente retención que experimentan los componentes de una mezcla, al ser más o menos adsorbidos por los componentes de una fase fija, cuando son arrastrados por un disolvente. Este adsorbente, generalmente con un adhesivo, se deposita sobre una hoja de vidrio o de otro material que actúa como soporte inerte de la capa.
Intervienen los fenómenos de adsorción y disolución, por consiguiente es fundamental tener en cuenta la polaridad, tanto de las sustancias a arrastrar como del disolvente, si queremos tener una buena separación.
El disolvente debe encontrarse en un recipiente cerrado (cámara de cromatografía) y en contacto con la placa de cromatografía, asciende y arrastra las sustancias a distinta velocidad según la mayor o menor retención que experimenten.
La técnica, en forma generalizada, comprende:

* Preparación del disolvente
* Preparación de la cámara de cromatografía
* Desarrollo del cromatograma
* Secado
* Revelado de las sustancias separadas

En este Práctico se va a realizar la siembra y posterior revelado de los extractos de sangre y/u orina obtenidos la clase anterior, para luego interpretar los resultados obtenidos y si hay presencia o no de algún tóxico.

MATERIALES UTILIZADOS:

- Placas cromatográficas de sílica gel GF 254nm.

- Capilares no heparinizados.

- Cuba con tapa siliconada.

- Asperjador.

- Cámara de luz UV a 254nm y a 366nm.

 

 

 

 

 

 

 

PROCEDIMIENTO:

-Se prepara una cuba con la fase móvil correspondiente, la cual debe medir aproximadamente 1cm para evitar que toque la línea de siembra. La tapa debe tener en los bordes grasa de silicona para que el cierre sea hermético. Se deja saturar con los vapores a temperatura ambiente.

 

- En la placa de cromatografía se marca con un lápiz la línea de siembra (aproximadamente 1,5cm del borde inferior) y el límite de la corrida (1cm del borde superior). Rotular con lápiz cada punto de siembra.

 

- Los extractos secos obtenidos de cada una de las extracciones se redisuelven en metanol y se procede a sembrar.

 

- Las siembras se realizan con capilares no heparinizados. La siembra debe ser puntual. Las muestras se deben concentrar 50-60 veces (sembrando con el mismo capilar una vez encima de la anterior) y secando cada vez. Los testigos sembrar una sola vez o más de acuerdo a la concentración en la que se encuentren

 

- Una vez finalizada la siembra, introducir la placa de manera vertical en la cuba, teniendo la precaución de que la línea de siembra quede por encima del solvente. En caso contrario la muestra y los testigos se diluirán en el solvente y no se verá la corrida. El disolvente asciende entonces por capilaridad a lo largo de la placa, arrastrando a los compuestos a diferentes velocidades, según el grado de adsorción de éstos produciéndose así su separación.

 

-- Cuando la fase móvil alcanza el límite prefijado, retirar la placa de la cuba y dejar secar en posición horizontal.

 

  • Para el extracto éter etílico:

Fase móvil: cloroformo-acetona (80:20)

Testigos: Barbitúricos, Hidantoínas, Glutetimidas, Meprobamato, Salicilatos y otros antipiréticos.

Revelado Secuencial:

-         Cloruro de Mercurio en etanol.

-         Difenilcarbazona en etanol.

-         Tricloruro Férrico.

 

Con los dos primeros reveladores darán manchas los Barbitúricos y algunas hidantoínas. Con el Tricloruro férrico se revela los fenoles, así se puede observar la presencia  Ac. Acetil Salicilico y otros antipiréticos.

 

 

  • Para el extracto alcalino:

Fase móvil: metanol-amoníaco (100:0,15)

Testigos: Benzodiacepinas, Carbamacepinas, Fenotiazinas, Butirofenonas, Anfetaminas, Antidepresivos tricíclicos, Cocaína, Estricnina, Opiáceos y otros alcaloides.

Revelado Secuencial:

-         HCL 10%

-         NQS

-         Iodoplatinato acidificado

-         Rvo de Draggendorff

 

Con el HCl se revelan fenotiazinas y algunas benzodiacepinas aumentan su fluorescencia a 366 nm. NQS revela principalmente a la dipirona. Iodoplatinato se aplica para ver  aminas terciarias y compuestos de amonio cuaternario; y Draggendorff se usa para alcaloides terciarios; ambos reactivos permiten principalmente revelar Benzodiacepinas y Cocaína.

 

 

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